Die eerste stap van CAR-T-kommersialisering

Bron: T&L Biotegnologie Vrystellingstyd: 2023-08-31

As 'n nuwe metode van geïndividualiseerde tumor-immunoterapie, CAR-T Selterapie het groot terapeutiese potensiaal getoon. Kommersiële bedrywighede beteken egter nuwe uitdagings. In vergelyking met tradisionele chemikalieë, het "lewende" biofarmaseutiese middels groter onsekerheid, potensiële probleme en risiko's. Farmaseutiese maatskappye moet eers 'n redelike stel toetsspesifikasies formuleer om die veiligheid en doeltreffendheid van CAR-T-produkte te verseker. Kom ons kyk vandag na hoe om die kwaliteit van CAR-T-produkte te verseker en pasiënte beter te bevoordeel.

1. CAR-T-selversterkingvermoë in vitro
CAR-T-selterapie vereis dat eers T-limfosiete van die pasiënt se liggaam verkry word, en dan CAR-geteikende domeine getransduseer word deur middel van in vitro transgeniese tegnologie. Hierdie proses moet volledig versterk word in die selkultuurstelsel om genoeg terapeutiese CAR-T-selle te verkry. Daarom bepaal die in vitro-amplifikasievermoë van CAR-T-selle direk of die aantal selle verkry kan word om aan die behoeftes van behandeling te voldoen. Ons kan die in vitro-amplifikasievermoë van CAR-T-selprodukte evalueer deur die kumulatiewe aantal selle wat verkry word deur verskeie generasies van kultuur, die toename in selamplifikasie en die kultuurtyd wat benodig word om die aantal selle te bepaal [1]. Hierdie indekse weerspieël die proliferasie en vitaliteit van CAR-T-selle, en is een van die belangrikste prestasie-indekse vir die ontwikkeling van CAR-T-seltegnologie.

Fig1: CAR-T-sel amplifikasieproses in vitro

2. Volharding van CAR-T-selle in vivo
Die oorlewingstyd en volharding van CAR-T-selle na infusie is ook belangrike aanwysers van funksie. Langlewende CAR-T-selle kan 'n meer blywende tumordodende effek hê. Ons bespeur gewoonlik gereeld veranderinge in die aantal CAR-T-selle in perifere bloed deur middel van vloeisitologie om hul volharding in vivo te evalueer. Oor die algemeen kan dit voortdurend 1-6 maande of meer na infusie opgespoor word. Die piekdeteksie vind gewoonlik 1-2 weke na infusie plaas. Dit is normaal dat die aantal CAR-T-selle mettertyd afneem. Die ideale CAR-T-selformulering moet 'n oorlewingstyd van ten minste 3-6 maande in vivo hê, slegs op hierdie manier kan 'n bevredigende terapeutiese effek verseker word.

Fig2: Persistensie-verwante opsporing van CAR-T-selle in vivo

3. Tumor-teikenprestasie van CAR-T-selle
Die sleutelmeganisme van CAR-T-selterapie is dat T-limfosiete 'n hoë affiniteit verkry het vir die vermoë om tumoroppervlak-spesifieke antigene na modifikasie te identifiseer, dus moet CAR-T-selprodukte eksplisiet die vermoë hê om tumorselle te teiken. Ons kan die dodelike effek van CAR-T-selle op tumorsellyne wat geteikende antigene uitdruk in vitro opspoor om hul teikenprestasie te beoordeel. Daarbenewens kan ons ook die infiltrasie van CAR-T-selle in die tumorweefsel opspoor deur vloeisitometrie in die pasiënt se liggaam om te sien of dit die tumorplek doeltreffend kan binnedring om 'n dodelike funksie te vervul [3]. Die ideale CAR-T-selle moet hoogs verryk wees in die tumor.

4. Sitotoksiese aktiwiteit van CAR-T-selle
Nadat CAR-T-selle gewasse herken en aktiveer, sal hulle verskeie sitokiene en sitotoksiese deeltjies vrystel om gewasselle aan te val en dood te maak. Daarom kan ons die vlakke van IFN-γ, TNF-α, perforien, korrelagtige ensiem en ander molekules wat deur CAR-T-selle vrygestel word, opspoor om die sitotoksiese aktiwiteit en aktiveringsstatus van die doodmaak van gewasse te evalueer [4]. In vitro kan ons die inhoud van die bogenoemde sitokiene en toksiene deur saamgekweekte CAR-T-selle en teikengewasselle opspoor. Die degranulasie-eksperiment kan ook intuïtief die vlak van CAR-T-selle wat perforien en granulase vrystel, weerspieël, wat belangrike aanwysers is om die doodmaakaktiwiteit van CAR-T-selprodukte te evalueer.

Fig4: Opsporing van die vermoë van CAR-T-selle om teikenselle dood te maak

5. Geheuevermoë van CAR-T-selle
Ideale CAR-T-selle behoort ook geheuefunksie te hê, dit wil sê hulle kan sterker aktiwiteit bereik na herhaalde aktivering en vinniger op tumorseine reageer [5]. Ons kan die geheue-effekte van CAR-T-selle opspoor deur hulle verskeie kere in vitro te stimuleer, soos 'n toename in die vlak van sitokienvrystelling en 'n verbetering in die doodmaakaktiwiteit. Nadat hierdie CAR-T-sel met geheuevermoë in die liggaam ingespuit is, kan dit 'n langer blywende en sterker doodmaakeffek op gewasse bereik.

Fig5: Langtermyn-persistensie-opsporing van CAR-T-selle

6. Veiligheidsevaluering van CAR-T-selterapie

Die hoofrisiko van CAR-T-selterapie is dat dit ernstige sitokienvrystellingsindroom kan veroorsaak. Daarom moet ons die vlakke van CRS-verwante sitokiene soos IL-6, IL-10 en IFN-γ wat deur CAR-T-selle geproduseer word, opspoor en die risiko bepaal dat CAR-T-selterapie CRS kan veroorsaak. Daarbenewens is dit nodig om ander moontlike toksiese newe-effekte te monitor.
Hierdie aanwysers kan die sleutelprestasie van CAR-T-selle ten volle weerspieël, insluitend proliferasievermoë, tumorteikening, sitotoksiese aktiwiteit, volharding en veiligheid. Slegs CAR-T-selprodukte wat gelyktydig aan die bogenoemde vereistes en aanwysers voldoen, kan 'n werklike antitumor-effek in die kliniese praktyk hê. Daarom is dit nodig om 'n wetenskaplike en redelike kwaliteitsevalueringstelsel te vestig en struikelblokke te verwyder vir die ontwikkeling van gereed-vir-gebruik produkte vir die ontwikkeling van hoë-aktiwiteit en hoë-gehalte CAR-T-selprodukte, om sodoende die langtermyndoelwit te bereik om koste te verminder en behandelingseffektiwiteit in die toekoms te verbeter, en om meer pasiënte wat behandeling benodig, te bevoordeel.

Aanbeveling van sterproduk
As die gewildste sterterapie tans, is CAR-T-terapie goedgekeur vir lysing met die derde CAR-T-produk in China. Relevante CAR-T-ondernemings en -platforms het die tempo van navorsing en ontwikkeling versnel en aktief gefokus op gedifferensieerde uitleg. Sommige ondernemings meeding nie net om produkveiligheidsprestasie nie, maar dit is noodsaaklik vir relevante ondernemings om koste te verminder en doeltreffendheid te verhoog, en binnelandse vervanging sal ook die hoofweg vir industriële ontwikkeling word. Immuun Magnetiese kraals is belangrike grondstowwe vir die voorbereiding van CAR-T-selle, en speel 'n baie belangrike rol in die skeidings- en aktiveringsproses van T-selle. Tonglihaiyuan GMP-vlakproduk ActSep ® CD3/CD28 Skeidings- en Aktiveringsmagnetiese Krale (itemnommer: GMP-TL603) integreer skeidings- en aktiveringsfunksies om die skeiding, aktivering en amplifikasie van T-selle doeltreffend te bereik. Dit is geskik vir verwante toepassings van menslike T-selle, CAR-T en ander T-selkulture. Boonop het die produk die DMF Tipe II-indiening by die Amerikaanse FDA voltooi (indieningsnommer: 038124), wat die registrasie en verklaring van sellulêre medisyne ondersteun.

ActSep® CD3/CD28 Skeiding en Aktivering Magnetiese Krale

1. T-sel uitputtingsvlak

Die ekspressievlakke van LAG3 en PD1 word waargeneem na T-selaktiveringskultuur van 14 dae met verskillende magnetiese kraal-toevoegingsverhoudings. ActSep® is basies dieselfde as dié van mededingers. Die ekspressie van ActSep® se uitputtingsindeks is laer onder die verhouding van 3:1 magnetiese krale tot sel. Boonop sal die verwydering van magnetiese krale op Dag 5 die uitputtingsvlak van T-selle verder verminder.

2. T-sel subtipe analise

Bespeur die veranderinge van T-sel subtipes by verskillende kweekpunte na ActSep® skeidingsaktivering. Die proporsie van Tcm neem toe tydens die kweekproses, en die verhouding van Teff tot Tem neem toe met die verlenging van die kweektyd.

Oor T&L
T&L Biotechnology Bpk., gestig in 2011, fokus op die navorsing en ontwikkeling van stroomop GMP-graad grondstowwe en reagense vir sel- en geenterapie (KGT). Ons verbind ons daartoe om betroubare produkte en dienste vir lewenswetenskappe te verskaf.