La première étape de la commercialisation des CAR-T
Source : T&L Biotechnology Date de publication : 31/08/2023
En tant que nouvelle méthode d'immunothérapie tumorale individualisée, CAR-T Thérapie cellulaire a démontré un grand potentiel thérapeutique. Cependant, son exploitation commerciale pose de nouveaux défis. Comparés aux produits chimiques traditionnels, les produits biopharmaceutiques « vivants » présentent davantage d'incertitudes, de problèmes potentiels et de risques. Les entreprises pharmaceutiques doivent d'abord formuler un ensemble raisonnable de spécifications de tests pour garantir la sécurité et l'efficacité des produits CAR-T. Aujourd'hui, examinons comment garantir la qualité des produits CAR-T et améliorer le bien-être des patients.
1. Capacité d'amplification des cellules CAR-T in vitro
La thérapie cellulaire CAR-T nécessite d'abord l'obtention de lymphocytes T du patient, puis la transduction des domaines CAR ciblés par une technologie transgénique in vitro. Ce processus doit être pleinement amplifié en culture cellulaire pour obtenir suffisamment de cellules CAR-T thérapeutiques. Par conséquent, la capacité d'amplification in vitro des cellules CAR-T détermine directement la capacité à obtenir le nombre de cellules nécessaire au traitement. Nous pouvons évaluer la capacité d'amplification in vitro des produits cellulaires CAR-T en fonction du nombre cumulé de cellules obtenues grâce à plusieurs générations de culture, de l'augmentation de l'amplification cellulaire et du temps de culture nécessaire pour déterminer le nombre de cellules [1]. Ces indices reflètent la prolifération et la vitalité des cellules CAR-T et constituent l'un des indicateurs de performance clés pour le développement de la technologie des cellules CAR-T.
Fig1 : Processus d'amplification des cellules CAR-T in vitro
2. Persistance des cellules CAR-T in vivo
La survie et la persistance des cellules CAR-T après perfusion sont également des indicateurs importants de leur fonction. Des cellules CAR-T à longue durée de vie peuvent exercer un effet tumoral plus durable. Nous détectons régulièrement des variations du nombre de cellules CAR-T dans le sang périphérique par cytologie de flux afin d'évaluer leur persistance in vivo. Généralement, la détection est continue pendant 1 à 6 mois, voire plus, après la perfusion. Le pic de détection est généralement observé 1 à 2 semaines après la perfusion. Il est normal que le nombre de cellules CAR-T diminue avec le temps. La formulation idéale de cellules CAR-T doit avoir une survie d'au moins 3 à 6 mois in vivo, ce qui est la seule façon de garantir un effet thérapeutique satisfaisant.
Fig2 : Détection liée à la persistance des cellules CAR-T in vivo
3. Performances de ciblage tumoral des cellules CAR-T
Le mécanisme clé de la thérapie cellulaire CAR-T réside dans la forte affinité des lymphocytes T pour identifier les antigènes spécifiques de surface tumorale après modification. Les produits CAR-T doivent donc avoir la capacité de cibler les cellules tumorales. Nous pouvons détecter l'effet létal des CAR-T sur des lignées cellulaires tumorales exprimant des antigènes ciblés in vitro afin d'évaluer leur efficacité de ciblage. De plus, nous pouvons également détecter l'infiltration des CAR-T dans le tissu tumoral par cytométrie de flux chez le patient afin de déterminer leur capacité à pénétrer efficacement dans la tumeur et à exercer une fonction létale [3]. Les CAR-T idéaux doivent être fortement enrichis dans la tumeur.
4. Activité cytotoxique des cellules CAR-T
Une fois que les cellules CAR-T ont reconnu et activé les tumeurs, elles libèrent diverses cytokines et particules cytotoxiques pour attaquer et tuer les cellules tumorales. Ainsi, nous pouvons détecter les taux d'IFN-γ, de TNF-α, de perforine, d'enzyme granulaire et d'autres molécules libérées par les cellules CAR-T afin d'évaluer l'activité cytotoxique et l'état d'activation des cellules tumorales [4]. In vitro, nous pouvons détecter la teneur en ces cytokines et toxines par des cellules CAR-T co-cultivées avec des cellules tumorales cibles. L'expérience de dégranulation peut également refléter intuitivement le taux de libération de perforine et de granulase par les cellules CAR-T, indicateurs importants pour évaluer l'activité destructive des produits des cellules CAR-T.
Fig4 : Détection de la capacité des cellules CAR-T à tuer les cellules cibles
5. Capacité de mémoire des cellules CAR-T
Idéalement, les cellules CAR-T doivent également posséder une fonction mémoire, c'est-à-dire qu'elles peuvent atteindre une activité plus intense après des activations répétées et répondre plus rapidement aux signaux tumoraux [5]. Nous pouvons détecter les effets mémoire des cellules CAR-T en les stimulant plusieurs fois in vitro, par exemple en augmentant la libération de cytokines et en renforçant leur activité destructive. Une fois ces cellules CAR-T dotées de cette capacité mémoire injectées dans l'organisme, elles peuvent exercer un effet destructive plus durable et plus puissant sur les tumeurs.
Fig5 : Détection de la persistance à long terme des cellules CAR-T
6. Évaluation de la sécurité de la thérapie cellulaire CAR-T
Le principal risque de la thérapie cellulaire CAR-T est de provoquer un syndrome de libération de cytokines sévère. Il est donc nécessaire de détecter les taux de cytokines liées au CRS, telles que l'IL-6, l'IL-10 et l'IFN-γ, produites par les cellules CAR-T, et d'évaluer le risque de CRS par la thérapie cellulaire CAR-T. De plus, il est nécessaire de surveiller d'éventuels autres effets secondaires toxiques.
Ces indicateurs reflètent pleinement les performances clés des cellules CAR-T, notamment leur capacité de prolifération, leur ciblage tumoral, leur activité cytotoxique, leur persistance et leur innocuité. Seuls les produits CAR-T répondant simultanément aux exigences et aux indicateurs susmentionnés peuvent exercer un réel effet antitumoral en pratique clinique. Il est donc nécessaire de mettre en place un système d'évaluation de la qualité scientifique et raisonnable et de lever les obstacles au développement de produits prêts à l'emploi pour développer des cellules CAR-T hautement actives et de haute qualité, afin d'atteindre l'objectif à long terme de réduction des coûts et d'amélioration de l'efficacité des traitements, et de bénéficier à un plus grand nombre de patients nécessitant un traitement.
Recommandation de produit vedette
Thérapie phare actuelle, la thérapie CAR-T a été approuvée pour l'homologation avec le troisième produit CAR-T en Chine. Les entreprises et plateformes CAR-T concernées ont accéléré le rythme de la recherche et du développement et se sont activement concentrées sur la différenciation des configurations. Outre la concurrence sur la sécurité des produits, il est impératif pour les entreprises concernées de réduire leurs coûts et d'accroître leur efficacité. La substitution nationale deviendra également le principal levier de développement industriel. Perle magnétiqueLes billes magnétiques ActSep® CD3/CD28 de séparation et d'activation (référence GMP-TL603), produit de Tonglihaiyuan conforme aux normes GMP, intègrent des fonctions de séparation et d'activation pour une séparation, une activation et une amplification efficaces des cellules T. Elles conviennent aux applications liées aux cellules T humaines, aux cellules CAR-T et autres cultures de cellules T. De plus, le produit a obtenu le DMF de type II auprès de la FDA américaine (numéro de dépôt : 038124), ce qui permet l'enregistrement et la déclaration des médicaments cellulaires.
Billes magnétiques de séparation et d'activation ActSep® CD3/CD28
1. Niveau d'épuisement des lymphocytes T
Les niveaux d'expression de LAG3 et PD1 sont détectés après 14 jours de culture d'activation des lymphocytes T avec différents ratios d'ajout de billes magnétiques. ActSep® est globalement identique à celui de ses concurrents. L'indice d'épuisement d'ActSep® est plus faible avec un ratio de 3:1 billes magnétiques/cellules. De plus, le retrait des billes magnétiques au jour 5 réduira encore davantage le niveau d'épuisement des lymphocytes T.
2. Analyse des sous-types de lymphocytes T
Détectez les changements de sous-types de lymphocytes T à différents points de culture après activation de la séparation par ActSep®. La proportion de Tcm augmente pendant la culture, et le rapport Teff/Tem augmente avec la durée de culture.
À propos de T&L
Fondée en 2011, T&L Biotechnology Ltd. se concentre sur la recherche et le développement de matières premières et de réactifs de qualité BPF en amont pour la thérapie cellulaire et génique (TCG). Nous nous engageons à fournir des produits et services fiables pour les sciences de la vie.