Achoimre ar Fhachtóirí Próitéine atá Bainteach le Cultúr Gaschealla Heamatapoietic
Foinse: T&L Biotechnology Am foilsithe: 2023-07-13
Réamhrá
Le blianta beaga anuas, GascheallTá úsáid níos forleithne á baint astu in iarratais chliniciúla. Mar sin féin, tá cion agus cainníocht na ngascheall i gcorp an duine thar a bheith íseal, rud nach féidir leis freastal ar riachtanais chliniciúla. Dá bhrí sin, tá leathnú agus saothrú gascheall in vitro ag éirí níos tábhachtaí. Mar gheall ar chúiseanna eiticiúla agus teicneolaíocha, tá go leor fadhbanna fós roimh chóireáil gascheall. Tá marcóirí dromchla gaschealla/tionscadal haemaiteapóiéiteacha agus línte éagsúla cealla fola réasúnta soiléir, agus is féidir tréithe feinitíopacha na gcealla a roghnú go cainníochtúil, a dheighilt, agus is féidir a bhfeidhmeanna a bheith réasúnta saor, gan gá le próisis chasta iartheachtacha amhail "scafaill bhitheolaíocha" le haghaidh trasphlandú néaróg, soithíoch agus máinliachta. Dá bhrí sin, is é an tsamhail is fearr é le haghaidh leathnú agus difreáil gaschealla, agus tá sé áisiúil freisin le haghaidh úsáide cliniciúla dírí.
Tá ardleibhéal féin-athnuachana agus acmhainneachtaí iolracha difreála ag gaschealla hematopoietic. Is féidir leo gach ceall fola aibí a tháirgeadh, amhail cealla fola dearga, cealla fola bána, pláitíní, agus limficítí, agus is féidir leo an córas hematopoietic ar fad a atógáil. Éilíonn leathnú in vitro gaschealla hematopoietic a gcumas féin-athnuachana a choinneáil agus a ndifreáil a chosc ag an am céanna, rud a fhágann gur teicneolaíocht an-dúshlánach í. Le blianta beaga anuas, léirigh líon mór turgnaimh go mbraitheann difreáil gaschealla hematopoietic ar chítocíní. Déanfaimid achoimre ghearr ar na fachtóirí agus a n-éifeachtaí a úsáidtear i gcultúr gaschealla hematopoietic.
Fachtóir gascheall (SCF)
Is fachtóir é fachtóir gascheall (SCF) a ghníomhaíonn tríd an ngabhdóir tíoróisín c-Kit a ancaireáil agus a chur in iúl ar dhromchla gach HSC. Mar thoradh ar léiriú lochtach c-Kit, laghdaítear líon na leathnú HSC. Faoi láthair, tá SCF i mbeagnach gach teaglaim cytokine a úsáidtear i dturgnaimh chultúir HSC. Ina theannta sin, baineann SCF agus FL3 araon leis an teaghlach TKR gabhdóra tíoróisín cínáis, a bhfuil éifeacht sineirgisteach aige ar chealla hematopoietic príomhúla atá ag leathnú. Trí cheangal le TKR sonrach, tarchuireann SCF comharthaí chuig na cealla, ag cur tús le deighilt agus leathnú luath cealla progenitor, rud a ligeann do chealla tosú ag leathnú agus a chuireann cosc ar apoptosis tar éis dóibh céim G0 a chríochnú.
Trombopoietin (Tpo）
Ar dtús, creideadh gur fachtóir fáis sonrach a bhí i TPO do mheigacariocytes, a bhain leis an gcatagóir cítocíní gníomhacha sonracha ar féidir leo leathnú, difreáil, aibiú, deighilt agus foirmiú pláitíní feidhmiúla i meiigacariocytes a chothabháil. Is é an fachtóir is fearr le haghaidh meiigacariocytes atá ag leathnú. Le blianta beaga anuas, tá sé deimhnithe ag turgnaimh go bhfuil ról tábhachtach ag TPO i gcur chun cinn staidéir leathnú HSC in vitro, agus nuair a chuirtear le chéile é le cítocíní eile, is féidir leis líon iomlán na n-aonad foirmithe coilíneachta agus fillte leathnú gaschealla CD34+ a mhéadú. Go háirithe i gcomhcheangail FL3, is féidir leis fás agus leathnú fadtéarmach gaschealla CD34+ fola corda a chothabháil.
Interleukin-3 (IL-3)
Interleukin-3 (IL-3), ar a dtugtar mais freisinCealla T fachtóir fáis, is cítocín pleiotrópach é a tháirgtear den chuid is mó ag limficítí T gníomhachtaithe, ar féidir leo iomadú agus difreáil cealla sinsearacha HSCanna ilchumhachtacha agus cealla sinsearacha atá dírithe ar shliocht éagsúil a spreagadh. Tar éis heitreadiméiriú gabhdóirí dromchla gaschealla spreagtha ag IL-3, is féidir leo ceangal le go leor próitéiní trasduchtaithe comhartha, amhail an bealach trasduchtóir comharthaíochta Janus kinase agus gníomhachtaitheoir trascríobh (JAK/STAT), rud a spreagann sreabhadh comhartha síosrialaithe agus a ghlacann páirt i rialáil leathnú gaschealla. Is féidir le IL-3 an bealach kinase rialaithe comhartha eachtarcheallach (ERK) agus an bealach c-jun aminotransferase (JNK) a ghníomhachtú freisin, rud a spreagann fás, leathnú agus marthanacht gaschealla.
Interleukin-6 (IL-6)
Is cítocín ilthreoch é IL-6 a bhfuil ról tábhachtach aige i gcosaint an óstaigh trí fhreagairtí imdhíonachta agus athlastacha a rialáil. Déantar IL-6 a tháirgeadh ag cealla T, monaicítí, fibroblasts, cealla endothelial, agus ceiratinicítí, agus tá feidhmeanna bitheolaíocha iomadúla aige. Is féidir leis difreáil cealla B agus táirgeadh antashubstaintí a chur chun cinn, go sineirgisteach imríonn IL-3 ról i bhforbairt meigeacaraicítí agus táirgeadh pláitíní, léiriú próitéiní géarchéime san ae a spreagadh, agus meitibileacht cnámh a rialáil. Tarchuireann IL-6 comharthaí tríd an gcóras gabhdóra IL-6, atá comhdhéanta de dhá shlabhra: IL-6Rα agus gp130. Is é STAT3 an mhóilín cinntitheach chun staid neamhdhifreáilte gaschealla suthacha a chothabháil, agus is é IL-6 an chéad thionscnóir den chonair chomharthaíochta JAK/STAT3.
Ligand LFLT3 (FL)
Is fachtóir fáis é ligand FLT3 a rialaíonn leathnú luath cealla hematopoietic. Ceanglaíonn ligand FLT3 le cealla a léiríonn gabhdóir cínáis tíoróisín FLT3. Ní spreagann an ligand FLT3 féin leathnú luathchealla hematopoietic, ach ina ionad sin spreagann sé fás agus difreáil le CSFanna agus interleukins eile go sineirgisteach. Murab ionann agus SCF, níl aon éifeacht ag ligand FLT3 ar chealla mast. Aithníodh ilchineálacha de ligand FLT3. Tá an phríomhfhoirm bhithghníomhach ar ancaire ar dhromchla na cille mar an fearann eachtarcheallach de phróitéin trasmembrane (209a.). Is féidir leis na próitéiní an isiméir atá ceangailte le membrane a scoilteadh chun isiméirí intuaslagtha bitheolaíocha gníomhacha a ghiniúint.
FMS-Liocrais Síneach 3
Tarchuireann an cínéis tíoróisín 3 (FL3) cosúil le FMS, atá léirithe go hard i gcealla CD34+CD38dim, comharthaí chuig an gcill trí cheangal lena gabhdóirí gníomhacha cínéis tíoróisín (TKRanna) sonracha. Gníomhaíonn FL3 ar HSC/HPC agus cuireann sé rialáil hematopoietic i bhfeidhm trí cheangal le TKR ar dhromchla na cille. Is fachtóir spreagúil luath-tháscaire an-tábhachtach é FL3 freisin, a bhfuil éifeacht shuntasach aige chun cinn ar leathnú in vitro HSC/HPC. Is féidir leis cosc a chur ar chealla gas CD34+ ó dhifreáil agus ídiú HPC de réir a chéile le linn leathnú in vitro.
Fachtóir fáis claochlaitheach - β
Fachtóir fáis claochlaitheach - β, fochineálacha mamaigh fachtóir fáis claochlaitheach - β1, β2 agus β3 a astaíonn comharthaí tríd an ngabhdóir céanna, rud a chruthaíonn freagairtí bitheolaíocha comhchosúla. Is cítocíní ilfheidhmeacha iad a rialaíonn leathnú, fás, difreáil agus gluaiseacht cille, chomh maith le sintéis agus taisceadh maitrís eachtarcheallach. Déantar fachtóir fáis claochlaitheach - β (TGF-β) a tháirgeadh ag cealla strómacha smior cnámh. Cuireann sé cosc ar HSC/HPC luath dul isteach sa chéim S, rud a fhágann go bhfuil an chuid is mó de HSC/HPC sa chéim G0.
Próitéin athlastach macrafagach-1 α
Is antagonist nádúrtha de MIP-1α é próitéin athlastach macrafagach-1β (MIP-1β), agus bíonn sé in éineacht leis. Is féidir leis an éifeacht choscach de MIP-1α ar HSC/HPC luath a mhaolú agus cosc a chur ar HSC filleadh ar staid chiúin.
P38
Cuireann P38, mar mhóilín comharthaíochta a bhaineann leis an teaghlach próitéine cínáis gníomhachtaithe mitogen (MAPK), cosc ar leathnú in vitro HSCanna faoi dhálaí normoxacha. Léirigh turgnaimh nuair a chuirtear HSCanna le meáin chultúir saor ó serum ina bhfuil TPO, SCF, agus FL3, go ngníomhaíonn strus ocsaídiúcháin p38 agus p16, rud a fhágann laghdú suntasach ar líon HSCanna lucha.
Fachtóir spreagúil coilíneach granulomacrophage (GM-CSF)
Is druga é fachtóir spreagúil coilíneach macrafagaigh granulocyte a úsáidtear go cliniciúil le haghaidh cúiseanna éagsúla leukopenia nó granulocytopenia. Is é fachtóir spreagúil coilíneach macrafagaigh granulocyte (GM-CSF) an gníomhaire soghluaisteachta cealla reatha, rud a mhéadaíonn ní hamháin líon na ngaschealla hematopoietic san fhuil imeallach, ach a chuidíonn freisin le feidhm chairdiach agus feidhmeanna eile.
Fachtóir spreagúil coilíneach granulocyte (G-CSF)
Go ginearálta, áirítear ar éifeachtaí fachtóirí spreagúla coilíneachta granulocyte cur i láthair antaiginí, feabhsú feidhm macrafagaigh, agus cur chun cinn leathnú gaschealla hematopoietic. Is gníomhaire soghluaisteachta cumhachtach é fachtóir spreagúil coilíneachta granulocyte do chealla gas smeara cnámh, ar féidir leis leathnú gaschealla smeara cnámh uathlogacha a spreagadh agus iad a shlógadh ón smeara cnámh go dtí an fhuil imeallach.
Eiritreapoéitin (EPO)
Is é erythropoietin (EPO) an príomhfhachtóir spreagúil i ndifreáil hematopoietic, rud a fhéadann difreáil gaschealla hematopoietic ina gcealla fola dearga primitive a chur chun cinn, deighilt agus leathnú cealla fola dearga óga a luathú, sintéis haemaglóibin a chur chun cinn, agus ról tábhachtach a imirt freisin i staidéar ar dhifreáil spreagtha ag cealla fola dearga.
Tá acmhainneacht ag gaschealla hematopoietic féin-athnuachana agus difreála ilthreorach. Bíonn éifeachtaí difriúla ag teaglaim fachtóirí éagsúla ar leathnú gaschealla hematopoietic. Is féidir le húsáid gaschealla hematopoietic táirgeadh ilchealla a spreagadh go roghnach, rud a sholáthraíonn smaointe nua gan amhras maidir le leathnú cealla NK. Faoi láthair, is féidir cealla NK a spreagadh ó ghaschella suthacha agus ó iPSCanna, ach ní mór gaschealla suthacha agus gaschealla ilchumhachtacha spreagtha araon a chlaochlú ina gaschealla hematopoietic sula bhféadann siad difreáil a dhéanamh ina gcealla NK. Dá bhrí sin, tá droichead fíor-riachtanach ag gaschealla hematopoietic sa phróiseas seo. Is iad na buntáistí a bhaineann le cealla NK a dhíorthaítear ó ghaschella gur féidir iad a úsáid ar éileamh, go bhfuil aonchineálacht láidir acu, scaoileadh íseal cítocín, agus gníomhaíocht mharú láidir. Dá bhrí sin, tá díograis mhór fós ann chun cealla NK díorthaithe ó ghaschella a iniúchadh ar an margadh. Tá litríochtaí ann maidir le hionduchtú gaschealla i gcealla NK. Dírímid go príomha ar na fachtóirí a luaitear sa litríocht.
1. Cealla NK díorthaithe ó chealla gas suthacha daonna
Aistríodh HESCanna chuig comhchultúr le líne cille strómacha smeara cnámh lucha M210-B4 i meán ina raibh RPMI 1640, 15% séiream féatais bólachta sainithe, 2 mM L-glútamín, 1% aimínaigéid neamhriachtanacha, 1% peinicillin/streiptimiocin, agus 0.1 mM -mearcaptoeatánól le hathruithe meán gach 2 go 3 lá mar a thuairiscíodh roimhe seo. Tar éis 17 go 20 lá, ullmhaíodh fionraí aoncheallach agus leithlisíodh cealla CD34+CD45+, mar a thuairiscíodh roimhe seo. Aistríodh cealla scoite chuig dara comhchultúr leis an líne cille strómalach díorthaithe ó ae féatais lucha AFT024 i meán ina raibh meascán 1:2 de mheán modhnaithe Dulbecco Eagle/Ham F12, 20% séiream daonna díghníomhaithe teasa AB, 2 mM L-glútamín, 1% peinicillin/streiptimiocin, 5 ng/mL seiléinít sóidiam, 50μM eatánólaimín, 25μM M-mearcaptoeatánól, 20 mg/mL aigéad ascorbach, inteirleukin-3, fachtóir gascheall, IL-15, ligand tíoróisín cínáis 3 cosúil le Fms, agus IL-7. Beathú na gcealla le meán úr trí leathathrú meán gach 5 go 6 lá. Tar éis 30 go 35 lá i gcultúr, bailíodh na cealla, scagadh iad trí scagaire 70-μm, agus úsáideadh iad le haghaidh tuilleadh anailíse.
2. Cealla NK díorthaithe ó chealla gas ilchumhachtacha daonna
Bhain muid cealla 18–21 lá d'aois le haghaidh saibhriú cealla sinsear CD34+ CD45+. Cuireadh céad míle cealla CD34+ CD45+ ar stróma EL08-1D2 le 1 ml de chítocíní tionscnaimh cealla NK (IL-3, IL7, IL-15, fachtóir gascheall, agus ligand gabhdóra cínáis tíoróisín-3 cosúil le fms). Athnuachanamar cultúir chealla NK le 0.5 ml de mheán ina raibh cítocín gach 4–5 lá. Tomhaiseadh cealla NK aibí ag 28–35 lá de chultúr ar EL08-1D2.
Cítocíní agus fachtóir fáis a bhaineann le gaschealla T&L
Maidir le T&L
Díríonn T&L Biotechnology Ltd., a bunaíodh sa bhliain 2011, ar thaighde agus ar fhorbairt amhábhair agus imoibrithe grád GMP suas an tsrutha do theiripe cille agus géine (CGT). Táimid tiomanta do tháirgí agus seirbhísí iontaofa a sholáthar don eolaíocht bheatha.