CAR-T के व्यावसायीकरण का पहला कदम

स्रोत: टी एंड एल बायोटेक्नोलॉजी रिलीज का समय: 2023-08-31

व्यक्तिगत ट्यूमर इम्यूनोथेरेपी की एक नई विधि के रूप में, CAR-T सेल थेरेपी ने बहुत अधिक चिकित्सीय क्षमता दिखाई है। हालाँकि, वाणिज्यिक संचालन का मतलब नई चुनौतियाँ हैं। पारंपरिक रसायनों की तुलना में, "जीवित" बायोफार्मास्युटिकल्स में अधिक अनिश्चितता, संभावित समस्याएँ और जोखिम हैं, फार्मास्युटिकल कंपनियों को पहले CAR-T उत्पादों की सुरक्षा और प्रभावशीलता सुनिश्चित करने के लिए परीक्षण विनिर्देशों का एक उचित सेट तैयार करना चाहिए। आज, आइए देखें कि CAR-T उत्पादों की गुणवत्ता कैसे सुनिश्चित करें और रोगियों को बेहतर लाभ कैसे पहुँचाएँ

1. इन विट्रो में CAR-T कोशिका प्रवर्धन क्षमता
सीएआर-टी सेल थेरेपी के लिए पहले रोगी के शरीर से टी लिम्फोसाइट्स प्राप्त करने की आवश्यकता होती है, और फिर इन विट्रो ट्रांसजेनिक तकनीक के माध्यम से सीएआर लक्षित डोमेन को ट्रांसड्यूस करना होता है। पर्याप्त चिकित्सीय सीएआर-टी कोशिकाओं को प्राप्त करने के लिए इस प्रक्रिया को सेल संस्कृति प्रणाली में पूरी तरह से प्रवर्धित करने की आवश्यकता होती है। इसलिए, सीएआर-टी कोशिकाओं की इन विट्रो प्रवर्धन क्षमता सीधे निर्धारित करती है कि उपचार की जरूरतों को पूरा करने के लिए कोशिकाओं की संख्या प्राप्त की जा सकती है या नहीं। हम संस्कृति की कई पीढ़ियों के माध्यम से प्राप्त कोशिकाओं की संचयी संख्या, सेल प्रवर्धन की वृद्धि और कोशिकाओं की संख्या निर्धारित करने के लिए आवश्यक संस्कृति समय के माध्यम से सीएआर-टी सेल उत्पादों की इन विट्रो प्रवर्धन क्षमता का मूल्यांकन कर सकते हैं [1]। ये सूचकांक सीएआर-टी कोशिकाओं के प्रसार और जीवन शक्ति को दर्शाते हैं

चित्र 1: इन विट्रो में CAR-T कोशिका प्रवर्धन प्रक्रिया

2. जीव में सीएआर-टी कोशिकाओं की दृढ़ता
जलसेक के बाद CAR-T कोशिकाओं का जीवित रहने का समय और दृढ़ता भी कार्य के महत्वपूर्ण संकेतक हैं। लंबे समय तक जीवित रहने वाली CAR-T कोशिकाएँ अधिक स्थायी ट्यूमर को मारने वाली भूमिका निभा सकती हैं। हम आमतौर पर फ्लो साइटोलॉजी के माध्यम से परिधीय रक्त में CAR-T कोशिकाओं की संख्या में नियमित रूप से परिवर्तन का पता लगाते हैं ताकि विवो में उनकी दृढ़ता का मूल्यांकन किया जा सके। आम तौर पर, जलसेक के बाद 1-6 महीने या उससे अधिक समय तक इसका पता लगाया जा सकता है। अधिकतम पता लगाना आमतौर पर जलसेक के 1-2 सप्ताह बाद होता है। समय के साथ CAR-T कोशिकाओं की संख्या में कमी आना सामान्य है। आदर्श CAR-T सेल फॉर्मूलेशन में विवो में कम से कम 3-6 महीने का जीवित रहने का समय होना चाहिए, केवल इस तरह से एक संतोषजनक चिकित्सीय प्रभाव सुनिश्चित किया जा सकता है।

चित्र 2: जीव में CAR-T कोशिकाओं की दृढ़ता-संबंधी पहचान

3. सीएआर-टी कोशिकाओं का ट्यूमर लक्ष्यीकरण प्रदर्शन
सीएआर-टी सेल थेरेपी का मुख्य तंत्र यह है कि टी लिम्फोसाइट्स को संशोधन के बाद ट्यूमर सतह-विशिष्ट एंटीजन की पहचान करने की क्षमता के लिए उच्च आत्मीयता प्राप्त हुई है, इसलिए सीएआर-टी सेल उत्पादों में ट्यूमर कोशिकाओं को लक्षित करने की क्षमता होनी चाहिए। हम इन विट्रो के माध्यम से लक्षित एंटीजन व्यक्त करने वाले ट्यूमर सेल लाइनों पर सीएआर-टी कोशिकाओं के मारक प्रभाव का पता लगा सकते हैं ताकि उनके लक्ष्यीकरण प्रदर्शन का न्याय किया जा सके। इसके अलावा, हम रोगी के शरीर में फ्लो साइटोमेट्री के माध्यम से ट्यूमर ऊतक में सीएआर-टी कोशिकाओं की घुसपैठ का भी पता लगा सकते हैं ताकि यह देखा जा सके कि क्या यह ट्यूमर साइट में घुसकर मारक कार्य कर सकता है [3]। आदर्श सीएआर-टी कोशिकाओं को ट्यूमर में अत्यधिक समृद्ध होना चाहिए।

4. सीएआर-टी कोशिकाओं की साइटोटॉक्सिक गतिविधि
CAR-T कोशिकाएं ट्यूमर को पहचानने और सक्रिय करने के बाद, वे ट्यूमर कोशिकाओं पर हमला करने और उन्हें मारने के लिए विभिन्न साइटोकिन्स और साइटोटॉक्सिक कण जारी करेंगी। इसलिए, हम ट्यूमर को मारने की साइटोटॉक्सिक गतिविधि और सक्रियण स्थिति का मूल्यांकन करने के लिए CAR-T कोशिकाओं द्वारा जारी IFN-γ, TNF-α, परफ़ोरिन, दानेदार एंजाइम और अन्य अणुओं के स्तर का पता लगा सकते हैं [4]। इन विट्रो में, हम सह-संवर्धित CAR-T कोशिकाओं और लक्ष्य ट्यूमर कोशिकाओं द्वारा उपरोक्त साइटोकिन्स और विषाक्त पदार्थों की सामग्री का पता लगा सकते हैं। डीग्रेन्यूलेशन प्रयोग भी सहज रूप से CAR-T कोशिकाओं द्वारा परफ़ोरिन और ग्रैन्यूलेज़ जारी करने के स्तर को दर्शा सकता है, जो CAR-T सेल उत्पादों की हत्या गतिविधि का मूल्यांकन करने के लिए महत्वपूर्ण संकेतक हैं।

चित्र 4: लक्ष्य कोशिकाओं को मारने की CAR-T कोशिकाओं की क्षमता का पता लगाना

5. सीएआर-टी कोशिकाओं की स्मृति क्षमता
आदर्श CAR-T कोशिकाओं में मेमोरी फ़ंक्शन भी होना चाहिए, इसका मतलब है कि वे बार-बार सक्रिय होने के बाद मजबूत गतिविधि प्राप्त कर सकते हैं और ट्यूमर संकेतों पर तेज़ी से प्रतिक्रिया कर सकते हैं [5]। हम इन विट्रो में कई बार उन्हें उत्तेजित करके CAR-T कोशिकाओं के मेमोरी प्रभावों का पता लगा सकते हैं, जैसे कि साइटोकाइन रिलीज़ के स्तर में वृद्धि और हत्या गतिविधि में वृद्धि। मेमोरी क्षमता वाली इस CAR-T कोशिका को शरीर में डालने के बाद, यह ट्यूमर पर लंबे समय तक चलने वाला और मजबूत मारक प्रभाव प्राप्त कर सकती है।

चित्र 5: सीएआर-टी कोशिकाओं की दीर्घकालिक दृढ़ता का पता लगाना

6. सीएआर-टी सेल थेरेपी का सुरक्षा मूल्यांकन

सीएआर-टी सेल थेरेपी का मुख्य जोखिम यह है कि इससे गंभीर साइटोकाइन रिलीज सिंड्रोम हो सकता है। इसलिए हमें सीएआर-टी कोशिकाओं द्वारा उत्पादित सीआरएस-संबंधित साइटोकाइन जैसे आईएल-6, आईएल-10 और आईएफएन-γ के स्तरों का पता लगाने की आवश्यकता है, और इस जोखिम का आकलन करना होगा कि सीएआर-टी सेल थेरेपी से सीआरएस हो सकता है। इसके अलावा, अन्य संभावित विषाक्त दुष्प्रभावों की निगरानी करना आवश्यक है।
ये संकेतक प्रसार क्षमता, ट्यूमर लक्ष्यीकरण, साइटोटॉक्सिक गतिविधि, दृढ़ता और सुरक्षा सहित CAR-T कोशिकाओं के प्रमुख प्रदर्शन को पूरी तरह से प्रतिबिंबित कर सकते हैं। केवल CAR-T सेल उत्पाद जो उपरोक्त आवश्यकताओं और संकेतकों को एक साथ पूरा करते हैं, वे नैदानिक ​​अभ्यास में वास्तविक एंटी-ट्यूमर प्रभाव निभा सकते हैं। इसलिए, उच्च-गतिविधि और उच्च-गुणवत्ता वाले CAR-T सेल उत्पादों के विकास के लिए एक वैज्ञानिक और उचित गुणवत्ता मूल्यांकन प्रणाली स्थापित करना और उपयोग के लिए तैयार उत्पादों के विकास में बाधाओं को दूर करना आवश्यक है, ताकि भविष्य में लागत कम करने और उपचार प्रभावशीलता में सुधार करने वाले दीर्घकालिक लक्ष्य को प्राप्त किया जा सके और उपचार की आवश्यकता वाले अधिक रोगियों को लाभान्वित किया जा सके।

स्टार उत्पाद अनुशंसा
वर्तमान में सबसे लोकप्रिय स्टार थेरेपी के रूप में, CAR-T थेरेपी को चीन में तीसरे CAR-T उत्पाद के साथ सूचीबद्ध करने के लिए मंजूरी दे दी गई है। प्रासंगिक CAR-T उद्यमों और प्लेटफार्मों ने अनुसंधान और विकास की गति को तेज कर दिया है और सक्रिय रूप से विभेदित लेआउट पर ध्यान केंद्रित किया है। उत्पाद सुरक्षा प्रदर्शन के लिए प्रतिस्पर्धा करने के अलावा, प्रासंगिक उद्यमों के लिए लागत कम करना और दक्षता बढ़ाना अनिवार्य है, और घरेलू प्रतिस्थापन भी औद्योगिक विकास का मुख्य तरीका बन जाएगा। प्रतिरक्षा चुंबकीय मोती CAR-T कोशिकाओं की तैयारी के लिए महत्वपूर्ण कच्चे माल हैं, और टी कोशिकाओं के पृथक्करण और सक्रियण प्रक्रिया में बहुत महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं। टोंगलीहाईयुआन जीएमपी स्तर का उत्पाद एक्टसेप ® सीडी 3 / सीडी 28 पृथक्करण और सक्रियण चुंबकीय मोती (आइटम नंबर: जीएमपी-टीएल 603) टी कोशिकाओं के पृथक्करण, सक्रियण और प्रवर्धन को कुशलतापूर्वक प्राप्त करने के लिए पृथक्करण और सक्रियण कार्यों को एकीकृत करता है। यह मानव टी कोशिकाओं, CAR-T और अन्य टी-कोशिका संस्कृति के संबंधित अनुप्रयोगों के लिए उपयुक्त है। इसके अलावा, उत्पाद ने यूएस एफडीए के साथ डीएमएफ टाइप II फाइलिंग पूरी कर ली है (फाइलिंग संख्या: 038124), जो सेलुलर दवाओं के पंजीकरण और घोषणा का समर्थन करता है।

ActSep® CD3/CD28 पृथक्करण और सक्रियण चुंबकीय मोती

1.टी-कोशिका थकावट स्तर

अलग-अलग चुंबकीय मनका जोड़ अनुपात के साथ 14 दिनों के टी-सेल सक्रियण संस्कृति के बाद LAG3 और PD1 के अभिव्यक्ति स्तरों का पता लगाया जाता है। ActSep® मूल रूप से प्रतियोगियों के समान ही है। ActSep® थकावट सूचकांक की अभिव्यक्ति 3:1 चुंबकीय मनकों से सेल के अनुपात के तहत कम है। इसके अलावा, 5वें दिन चुंबकीय मनकों को हटाने से टी कोशिकाओं का थकावट स्तर और कम हो जाएगा।

2. टी-कोशिका उपप्रकार विश्लेषण

ActSep® पृथक्करण सक्रियण के बाद विभिन्न संवर्धन बिंदुओं पर T-कोशिका उपप्रकारों के परिवर्तनों का पता लगाएं। खेती की प्रक्रिया के दौरान Tcm का अनुपात बढ़ता है, और खेती के समय के विस्तार के साथ Teff से Tem का अनुपात बढ़ता है।

टी एंड एल के बारे में
2011 में स्थापित टीएंडएल बायोटेक्नोलॉजी लिमिटेड, सेल और जीन थेरेपी (सीजीटी) के अपस्ट्रीम जीएमपी ग्रेड कच्चे माल और अभिकर्मकों के अनुसंधान और विकास पर ध्यान केंद्रित करता है। हम जीवन विज्ञान के लिए विश्वसनीय उत्पाद और सेवाएँ प्रदान करने के लिए प्रतिबद्ध हैं