Il primo passo verso la commercializzazione del CAR-T

Fonte: T&L Biotechnology Data di pubblicazione: 31/08/2023

Come nuovo metodo di immunoterapia tumorale individualizzata, CAR-T Terapia cellulare Ha dimostrato un grande potenziale terapeutico. Tuttavia, l'operatività commerciale comporta nuove sfide. Rispetto ai prodotti chimici tradizionali, i biofarmaci "vivi" presentano maggiori incertezze, potenziali problemi e rischi. Le aziende farmaceutiche devono innanzitutto formulare un insieme ragionevole di specifiche di test per garantire la sicurezza e l'efficacia dei prodotti CAR-T. Oggi, analizzeremo come garantire la qualità dei prodotti CAR-T e apportare maggiori benefici ai pazienti.

1. Capacità di amplificazione delle cellule CAR-T in vitro
La terapia con cellule CAR-T richiede innanzitutto l'ottenimento di linfociti T dall'organismo del paziente e la successiva trasduzione dei domini target delle cellule CAR-T mediante tecnologia transgenica in vitro. Questo processo deve essere completamente amplificato nel sistema di coltura cellulare per ottenere un numero sufficiente di cellule CAR-T terapeutiche. Pertanto, la capacità di amplificazione in vitro delle cellule CAR-T determina direttamente se è possibile ottenere il numero di cellule necessario per soddisfare le esigenze del trattamento. Possiamo valutare la capacità di amplificazione in vitro dei prodotti cellulari CAR-T attraverso il numero cumulativo di cellule ottenute attraverso più generazioni di coltura, l'aumento dell'amplificazione cellulare e il tempo di coltura necessario per stabilire il numero di cellule [1]. Questi indici riflettono la proliferazione e la vitalità delle cellule CAR-T e rappresentano uno degli indici di prestazione chiave per lo sviluppo della tecnologia delle cellule CAR-T.

Fig1: Processo di amplificazione delle cellule CAR-T in vitro

2. Persistenza delle cellule CAR-T in vivo
Anche il tempo di sopravvivenza e la persistenza delle cellule CAR-T dopo l'infusione sono importanti indicatori di funzionalità. Le cellule CAR-T a lunga vita possono avere un effetto di uccisione tumorale più duraturo. Solitamente rileviamo regolarmente variazioni nel numero di cellule CAR-T nel sangue periferico tramite citologia a flusso per valutarne la persistenza in vivo. Generalmente, è possibile rilevarle in modo continuativo per 1-6 mesi o più dopo l'infusione. Il picco di rilevamento si verifica solitamente 1-2 settimane dopo l'infusione. È normale che il numero di cellule CAR-T diminuisca nel tempo. La formulazione ideale di cellule CAR-T dovrebbe avere un tempo di sopravvivenza di almeno 3-6 mesi in vivo, solo in questo modo è possibile garantire un effetto terapeutico soddisfacente.

Fig2: Rilevamento correlato alla persistenza delle cellule CAR-T in vivo

3. Prestazioni di targeting tumorale delle cellule CAR-T
Il meccanismo chiave della terapia con cellule CAR-T è che i linfociti T hanno ottenuto un'elevata affinità per la capacità di identificare antigeni specifici della superficie tumorale dopo la modifica, quindi i prodotti delle cellule CAR-T devono avere esplicitamente la capacità di bersagliare le cellule tumorali. Possiamo rilevare l'effetto killer delle cellule CAR-T su linee cellulari tumorali che esprimono antigeni mirati tramite in vitro per valutare la loro capacità di targeting. Inoltre, possiamo anche rilevare l'infiltrazione di cellule CAR-T nel tessuto tumorale tramite citometria a flusso nel corpo del paziente per vedere se può entrare efficacemente nel sito del tumore per svolgere una funzione killer [3]. Le cellule CAR-T ideali dovrebbero essere altamente arricchite nel tumore.

4. Attività citotossica delle cellule CAR-T
Dopo che le cellule CAR-T riconoscono e attivano i tumori, rilasciano varie citochine e particelle citotossiche per attaccare e uccidere le cellule tumorali. Pertanto, possiamo rilevare i livelli di IFN-γ, TNF-α, perforina, enzima granulare e altre molecole rilasciate dalle cellule CAR-T per valutare l'attività citotossica e lo stato di attivazione dei tumori killer [4]. In vitro, possiamo rilevare il contenuto delle citochine e delle tossine di cui sopra da parte delle cellule CAR-T co-coltivate e delle cellule tumorali bersaglio. L'esperimento di degranulazione può anche riflettere intuitivamente il livello di cellule CAR-T che rilasciano perforina e granulasi, che sono indicatori importanti per valutare l'attività killer dei prodotti delle cellule CAR-T.

Fig4: Rilevazione della capacità delle cellule CAR-T di uccidere le cellule bersaglio

5. Capacità di memoria delle cellule CAR-T
Le cellule CAR-T ideali dovrebbero anche avere una funzione di memoria, ovvero essere in grado di raggiungere un'attività più forte dopo ripetute attivazioni e rispondere più velocemente ai segnali tumorali [5]. Possiamo rilevare gli effetti della memoria delle cellule CAR-T stimolandole più volte in vitro, come l'aumento del livello di rilascio di citochine e il potenziamento dell'attività di uccisione. Dopo che questa cellula CAR-T con capacità di memoria viene infusa nel corpo, può raggiungere un effetto di uccisione più duraturo e più forte sui tumori.

Fig5: Rilevamento della persistenza a lungo termine delle cellule CAR-T

6. Valutazione della sicurezza della terapia con cellule CAR-T

Il rischio principale della terapia con cellule CAR-T è la possibilità di causare una grave sindrome da rilascio di citochine. Pertanto, è necessario rilevare i livelli di citochine correlate alla CRS, come IL-6, IL-10 e IFN-γ, prodotte dalle cellule CAR-T, e valutare il rischio che la terapia con cellule CAR-T possa causare CRS. Inoltre, è necessario monitorare altri possibili effetti collaterali tossici.
Questi indicatori possono riflettere appieno le prestazioni chiave delle cellule CAR-T, tra cui la capacità di proliferazione, il targeting tumorale, l'attività citotossica, la persistenza e la sicurezza. Solo i prodotti a base di cellule CAR-T che soddisfano contemporaneamente i requisiti e gli indicatori sopra menzionati possono esercitare un reale effetto antitumorale nella pratica clinica. Pertanto, è necessario istituire un sistema di valutazione della qualità scientifico e ragionevole e rimuovere gli ostacoli allo sviluppo di prodotti pronti all'uso per lo sviluppo di prodotti a base di cellule CAR-T ad alta attività e di alta qualità, al fine di raggiungere l'obiettivo a lungo termine di ridurre i costi e migliorare l'efficacia del trattamento in futuro, a beneficio di un maggior numero di pazienti che necessitano di trattamento.

Raccomandazione del prodotto stellare
Essendo la terapia stellare più popolare al momento, la terapia CAR-T è stata approvata per la commercializzazione in Cina con il terzo prodotto CAR-T. Le aziende e le piattaforme CAR-T interessate hanno accelerato il ritmo di ricerca e sviluppo e si sono concentrate attivamente su un layout differenziato. Alcune aziende, oltre a competere per le prestazioni di sicurezza dei prodotti, è fondamentale per le aziende interessate ridurre i costi e aumentare l'efficienza, e la sostituzione interna diventerà anche la principale via per lo sviluppo industriale. Immunitario Perlina magneticaSono materie prime importanti per la preparazione di cellule CAR-T e svolgono un ruolo fondamentale nel processo di separazione e attivazione delle cellule T. Il prodotto di Tonglihaiyuan con certificazione GMP ActSep® CD3/CD28 Separation & Activation Magnetic Beads (codice articolo: GMP-TL603) integra le funzioni di separazione e attivazione per ottenere la separazione, l'attivazione e l'amplificazione delle cellule T in modo efficiente. È adatto per applicazioni correlate a cellule T umane, cellule CAR-T e altre colture di cellule T. Inoltre, il prodotto ha completato la domanda di registrazione DMF di tipo II presso la FDA statunitense (numero di domanda: 038124), a supporto della registrazione e della dichiarazione di farmaci cellulari.

ActSep® CD3/CD28 perline magnetiche per la separazione e l'attivazione

1. Livello di esaurimento delle cellule T

I livelli di espressione di LAG3 e PD1 vengono rilevati dopo 14 giorni di coltura di attivazione delle cellule T con diversi rapporti di aggiunta di biglie magnetiche. ActSep® è sostanzialmente identico a quello dei competitor. L'espressione dell'indice di esaurimento di ActSep® è inferiore con un rapporto di biglie magnetiche per cellula di 3:1. Inoltre, la rimozione delle biglie magnetiche al giorno 5 ridurrà ulteriormente il livello di esaurimento delle cellule T.

2. Analisi del sottotipo delle cellule T

Rileva le variazioni dei sottotipi di cellule T in diversi punti di coltura dopo l'attivazione della separazione con ActSep®. La percentuale di Tcm aumenta durante il processo di coltura e il rapporto tra Teff e Tem aumenta con l'aumentare del tempo di coltura.

Informazioni su T&L
T&L Biotechnology Ltd., fondata nel 2011, si concentra sulla ricerca e sviluppo di materie prime e reagenti di qualità GMP per la terapia cellulare e genica (CGT). Ci impegniamo a fornire prodotti e servizi affidabili per le scienze della vita.