Pirmasis CAR-T komercializavimo žingsnis

Šaltinis: „T&L Biotechnology“. Išleidimo laikas: 2023-08-31.

Kaip naujas individualizuotos navikų imunoterapijos metodas, CAR-T Ląstelių terapija parodė didelį terapinį potencialą. Tačiau komercinė veikla reiškia naujus iššūkius. Palyginti su tradicinėmis cheminėmis medžiagomis, „gyvieji“ biofarmaciniai preparatai yra labiau neapibrėžti, turi potencialių problemų ir rizikų. Farmacijos įmonės pirmiausia turi suformuluoti pagrįstą bandymų specifikacijų rinkinį, kad užtikrintų CAR-T produktų saugumą ir veiksmingumą. Šiandien panagrinėkime, kaip užtikrinti CAR-T produktų kokybę ir suteikti daugiau naudos pacientams.

1. CAR-T ląstelių amplifikacijos gebėjimas in vitro
CAR-T ląstelių terapijai pirmiausia reikia gauti T limfocitus iš paciento kūno, o tada transdukuoti CAR taikinius domenus naudojant in vitro transgeninę technologiją. Šis procesas turi būti visiškai amplifikuotas ląstelių kultūros sistemoje, kad būtų gauta pakankamai terapinių CAR-T ląstelių. Todėl CAR-T ląstelių amplifikacijos in vitro gebėjimas tiesiogiai lemia, ar galima gauti ląstelių skaičių, kad būtų patenkinti gydymo poreikiai. CAR-T ląstelių produktų amplifikacijos in vitro gebėjimą galime įvertinti pagal bendrą ląstelių skaičių, gautą per kelias kultūros kartas, ląstelių amplifikacijos padidėjimą ir kultivavimo laiką, reikalingą ląstelių skaičiui nustatyti [1]. Šie rodikliai atspindi CAR-T ląstelių proliferaciją ir gyvybingumą ir yra vienas iš pagrindinių CAR-T ląstelių technologijos plėtros našumo rodiklių.

1 pav.: CAR-T ląstelių amplifikacijos procesas in vitro

2. CAR-T ląstelių išlikimas in vivo
CAR-T ląstelių išgyvenamumas ir išlikimas po infuzijos taip pat yra svarbūs funkcijos rodikliai. Ilgaamžės CAR-T ląstelės gali atlikti ilgalaikį naviko naikinimo poveikį. Paprastai reguliariai stebime CAR-T ląstelių skaičiaus pokyčius periferiniame kraujyje, atlikdami tėkmės citologiją, kad įvertintume jų išlikimą in vivo. Paprastai jis gali būti nuolat aptinkamas 1–6 mėnesius ar ilgiau po infuzijos. Didžiausias aptikimo lygis paprastai pasiekiamas praėjus 1–2 savaitėms po infuzijos. Normalu, kad CAR-T ląstelių skaičius laikui bėgant mažėja. Ideali CAR-T ląstelių formulė turėtų išgyventi bent 3–6 mėnesius in vivo, tik tokiu būdu galima užtikrinti patenkinamą terapinį poveikį.

2 pav.: CAR-T ląstelių aptikimas in vivo, susijęs su jų išsilaikymu

3. CAR-T ląstelių gebėjimas nukreipti naviką
Pagrindinis CAR-T ląstelių terapijos mechanizmas yra tas, kad T limfocitai įgijo didelį afinitetą gebėjimui identifikuoti naviko paviršiaus specifinius antigenus po modifikavimo, todėl CAR-T ląstelių produktai turi aiškiai gebėti nukreipti savo veiksmus prieš naviko ląsteles. In vitro galime aptikti CAR-T ląstelių naikinamąjį poveikį naviko ląstelių linijoms, ekspresuojančioms tikslinius antigenus, kad galėtume įvertinti jų nukreipimo efektyvumą. Be to, srauto citometrijos metodu paciento organizme galime aptikti CAR-T ląstelių infiltraciją į naviko audinį, kad pamatytume, ar jos gali efektyviai patekti į naviko vietą ir atlikti naikinamąją funkciją [3]. Idealios CAR-T ląstelės turėtų būti labai praturtintos navike.

4. CAR-T ląstelių citotoksinis aktyvumas
Kai CAR-T ląstelės atpažįsta ir aktyvuoja navikus, jos išskiria įvairius citokinus ir citotoksines daleles, kad pultų ir naikintų naviko ląsteles. Todėl galime nustatyti CAR-T ląstelių išskiriamų IFN-γ, TNF-α, perforino, granuliuoto fermento ir kitų molekulių lygius, kad įvertintume citotoksinį aktyvumą ir navikų naikinimo aktyvacijos būseną [4]. In vitro galime aptikti minėtų citokinų ir toksinų kiekį kartu kultivuojamose CAR-T ląstelėse ir tikslinėse naviko ląstelėse. Degranuliacijos eksperimentas taip pat gali intuityviai atspindėti CAR-T ląstelių išskiriamo perforino ir granulazės lygį, kurie yra svarbūs rodikliai vertinant CAR-T ląstelių produktų naikinamąjį aktyvumą.

4 pav.: CAR-T ląstelių gebėjimo naikinti tikslines ląsteles nustatymas

5. CAR-T ląstelių atminties gebėjimas
Idealios CAR-T ląstelės taip pat turėtų atlikti atminties funkciją, tai yra, jos gali pasiekti stipresnį aktyvumą po pakartotinės aktyvacijos ir greičiau reaguoti į naviko signalus [5]. CAR-T ląstelių atminties poveikį, pavyzdžiui, padidinti citokinų išsiskyrimo lygį ir sustiprinti naikinamąjį aktyvumą, galime aptikti jas daug kartų stimuliuojant in vitro. Šią atminties gebėjimą turinčią CAR-T ląstelę suleidus į organizmą, ji gali pasiekti ilgalaikį ir stipresnį navikų naikinamąjį poveikį.

5 pav.: Ilgalaikis CAR-T ląstelių išsilaikymo nustatymas

6. CAR-T ląstelių terapijos saugumo vertinimas

Pagrindinė CAR-T ląstelių terapijos rizika yra ta, kad ji gali sukelti sunkų citokinų išsiskyrimo sindromą. Todėl turime nustatyti su KRS susijusių citokinų, tokių kaip IL-6, IL-10 ir IFN-γ, kuriuos gamina CAR-T ląstelės, kiekį ir įvertinti riziką, kad CAR-T ląstelių terapija gali sukelti KRS. Be to, būtina stebėti kitus galimus toksinius šalutinius poveikius.
Šie rodikliai gali visapusiškai atspindėti pagrindinius CAR-T ląstelių veiklos rodiklius, įskaitant proliferacijos gebėjimą, naviko nukreipimą, citotoksinį aktyvumą, išlikimą ir saugumą. Tik tie CAR-T ląstelių produktai, kurie vienu metu atitinka aukščiau nurodytus reikalavimus ir rodiklius, gali turėti realų priešnavikinį poveikį klinikinėje praktikoje. Todėl būtina sukurti mokslinę ir pagrįstą kokybės vertinimo sistemą ir pašalinti kliūtis, trukdančias kurti paruoštus naudoti produktus, skirtus didelio aktyvumo ir aukštos kokybės CAR-T ląstelių produktams, kad būtų pasiektas ilgalaikis tikslas – ateityje sumažinti išlaidas ir pagerinti gydymo veiksmingumą, taip pat padėti daugiau pacientų, kuriems reikalingas gydymas.

Žvaigždutės produkto rekomendacija
Šiuo metu populiariausia žvaigždžių terapija, CAR-T terapija buvo patvirtinta įtraukti į sąrašą kaip trečiasis CAR-T produktas Kinijoje. Atitinkamos CAR-T įmonės ir platformos paspartino mokslinių tyrimų ir plėtros tempą bei aktyviai sutelkė dėmesį į diferencijuotą išdėstymą. Kai kurios įmonės ne tik konkuruoja dėl produktų saugos, bet ir privalo sumažinti sąnaudas bei padidinti efektyvumą, o vietinė produktų pakaitalas taip pat taps pagrindiniu pramonės plėtros keliu. Magnetinis karoliukasyra svarbios žaliavos CAR-T ląstelėms ruošti ir vaidina labai svarbų vaidmenį T ląstelių atskyrimo ir aktyvinimo procese. „Tonglihaiyuan“ GMP lygio produktas „ActSep ® CD3/CD28 atskyrimo ir aktyvinimo magnetiniai karoliukai“ (prekės numeris: GMP-TL603) integruoja atskyrimo ir aktyvinimo funkcijas, kad būtų galima efektyviai atskirti, aktyvuoti ir amplifikuoti T ląsteles. Jis tinka žmogaus T ląstelių, CAR-T ir kitų T ląstelių kultūrų taikymams. Be to, produktas yra užpildytas DMF II tipo paraiškos forma JAV FDA (paraiškos numeris: 038124), kuri padeda registruoti ir deklaruoti ląstelinius vaistus.

ActSep® CD3/CD28 atskyrimo ir aktyvinimo magnetinės granulės

1. T ląstelių išsekimo lygis

LAG3 ir PD1 raiškos lygiai nustatomi po 14 dienų T ląstelių aktyvacijos kultūros, naudojant skirtingus magnetinių karoliukų pridėjimo santykius. ActSep® iš esmės yra toks pat kaip ir konkurentų. ActSep® išsekimo indekso raiška yra mažesnė, kai magnetinių karoliukų ir ląstelių santykis yra 3:1. Be to, magnetinių karoliukų pašalinimas 5 dieną dar labiau sumažins T ląstelių išsekimo lygį.

2. T ląstelių potipių analizė

Nustatyti T ląstelių potipių pokyčius skirtinguose kultivavimo taškuose po ActSep® atskyrimo aktyvinimo. Tcm dalis didėja kultivavimo proceso metu, o Teff ir Tem santykis didėja ilgėjant kultivavimo laikui.

Apie T&L
„T&L Biotechnology Ltd.“, įkurta 2011 m., daugiausia dėmesio skiria GMP klasės žaliavų ir ląstelių bei genų terapijos (CGT) reagentų tyrimams ir kūrimui. Esame įsipareigoję teikti patikimus produktus ir paslaugas gyvybės mokslams.