Primul pas al comercializării CAR-T

Sursă: T&L Biotechnology Data lansării: 31.08.2023

Ca o nouă metodă de imunoterapie tumorală individualizată, CAR-T Terapia celulară a demonstrat un potențial terapeutic deosebit. Cu toate acestea, operarea comercială înseamnă noi provocări. Comparativ cu substanțele chimice tradiționale, biofarmaceuticele „vii” prezintă o incertitudine mai mare, probleme potențiale și riscuri. Companiile farmaceutice trebuie mai întâi să formuleze un set rezonabil de specificații de testare pentru a asigura siguranța și eficacitatea produselor CAR-T. Astăzi, să aruncăm o privire asupra modului în care putem asigura calitatea produselor CAR-T și să aducem beneficii mai bune pacienților.

1. Capacitatea de amplificare a celulelor CAR-T in vitro
Terapia cu celule CAR-T necesită mai întâi obținerea limfocitelor T din corpul pacientului, iar apoi transducerea domeniilor CAR țintă prin tehnologie transgenică in vitro. Acest proces trebuie amplificat complet în sistemul de cultură celulară pentru a obține suficiente celule CAR-T terapeutice. Prin urmare, capacitatea de amplificare in vitro a celulelor CAR-T determină direct dacă numărul de celule poate fi obținut pentru a satisface nevoile tratamentului. Putem evalua capacitatea de amplificare in vitro a produselor celulare CAR-T prin numărul cumulativ de celule obținute prin mai multe generații de cultură, creșterea amplificării celulare și timpul de cultură necesar pentru a stabili numărul de celule [1]. Acești indici reflectă proliferarea și vitalitatea celulelor CAR-T și reprezintă unul dintre indicii cheie de performanță pentru dezvoltarea tehnologiei celulelor CAR-T.

Fig1: Procesul de amplificare a celulelor CAR-T in vitro

2. Persistența celulelor CAR-T in vivo
Timpul de supraviețuire și persistența celulelor CAR-T după perfuzie sunt, de asemenea, indicatori importanți ai funcției. Celulele CAR-T cu viață lungă pot juca un efect de distrugere a tumorii mai durabil. De obicei, detectăm în mod regulat modificări ale numărului de celule CAR-T din sângele periferic prin citologie în flux pentru a evalua persistența lor in vivo. În general, acestea pot fi detectate continuu 1-6 luni sau mai mult după perfuzie. Detectarea maximă are loc de obicei la 1-2 săptămâni după perfuzie. Este normal ca numărul de celule CAR-T să scadă în timp. Formularea ideală de celule CAR-T ar trebui să aibă un timp de supraviețuire de cel puțin 3-6 luni in vivo, numai în acest fel se poate asigura un efect terapeutic satisfăcător.

Fig2: Detectarea celulelor CAR-T in vivo, în funcție de persistență

3. Performanța de direcționare tumorală a celulelor CAR-T
Mecanismul cheie al terapiei cu celule CAR-T este acela că limfocitele T au o afinitate ridicată pentru capacitatea de a identifica antigene specifice suprafeței tumorale după modificare, așadar produsele celulare CAR-T trebuie să aibă în mod explicit capacitatea de a viza celulele tumorale. Putem detecta efectul de distrugere al celulelor CAR-T asupra liniilor celulare tumorale care exprimă antigene țintă prin in vitro pentru a evalua performanța lor de direcționare. În plus, putem detecta, de asemenea, infiltrarea celulelor CAR-T în țesutul tumoral prin citometrie în flux în corpul pacientului pentru a vedea dacă acestea pot pătrunde eficient în locul tumorii pentru a juca o funcție de distrugere [3]. Celulele CAR-T ideale ar trebui să fie puternic îmbogățite în tumoră.

4. Activitatea citotoxică a celulelor CAR-T
După ce celulele CAR-T recunosc și activează tumorile, acestea vor elibera diverse citokine și particule citotoxice pentru a ataca și distruge celulele tumorale. Prin urmare, putem detecta nivelurile de IFN-γ, TNF-α, perforină, enzimă granulară și alte molecule eliberate de celulele CAR-T pentru a evalua activitatea citotoxică și starea de activare a uciderii tumorilor [4]. In vitro, putem detecta conținutul citokinelor și toxinelor menționate mai sus prin co-cultivarea celulelor CAR-T și a celulelor tumorale țintă. Experimentul de degranulare poate, de asemenea, reflecta intuitiv nivelul celulelor CAR-T care eliberează perforină și granulază, care sunt indicatori importanți pentru evaluarea activității de distrugere a produselor celulelor CAR-T.

Fig4: Detectarea capacității celulelor CAR-T de a ucide celulele țintă

5. Capacitatea de memorare a celulelor CAR-T
Celulele CAR-T ideale ar trebui să aibă și funcție de memorie, adică să poată atinge o activitate mai puternică după activare repetată și să răspundă mai rapid la semnalele tumorale [5]. Putem detecta efectele de memorie ale celulelor CAR-T prin stimularea lor de mai multe ori in vitro, cum ar fi creșterea nivelului de eliberare de citokine și amplificarea activității de ucidere. După ce aceste celule CAR-T cu capacitate de memorie sunt infuzate în organism, acestea pot obține un efect de ucidere mai puternic și mai de lungă durată asupra tumorilor.

Fig5: Detectarea persistenței pe termen lung a celulelor CAR-T

6. Evaluarea siguranței terapiei cu celule CAR-T

Principalul risc al terapiei cu celule CAR-T este acela că poate provoca sindrom de eliberare severă de citokine. Prin urmare, trebuie să detectăm nivelurile de citokine legate de CRS, cum ar fi IL-6, IL-10 și IFN-γ, produse de celulele CAR-T, și să evaluăm riscul ca terapia cu celule CAR-T să provoace CRS. În plus, este necesar să se monitorizeze alte posibile efecte secundare toxice.
Acești indicatori pot reflecta pe deplin performanța cheie a celulelor CAR-T, inclusiv capacitatea de proliferare, direcționarea tumorii, activitatea citotoxică, persistența și siguranța. Doar produsele cu celule CAR-T care îndeplinesc simultan cerințele și indicatorii de mai sus pot juca un efect antitumoral real în practica clinică. Prin urmare, este necesar să se stabilească un sistem științific și rezonabil de evaluare a calității și să se elimine obstacolele din calea dezvoltării de produse gata de utilizare pentru dezvoltarea de produse cu celule CAR-T cu activitate ridicată și calitate superioară, astfel încât să se atingă obiectivul pe termen lung de reducere a costurilor și îmbunătățire a eficacității tratamentului în viitor și de a aduce beneficii mai multor pacienți care au nevoie de tratament.

Recomandare de produs vedetă
Fiind cea mai populară terapie vedetă în prezent, terapia CAR-T a fost aprobată pentru a fi listată ca al treilea produs CAR-T în China. Întreprinderile și platformele CAR-T relevante au accelerat ritmul cercetării și dezvoltării și s-au concentrat activ pe design diferențiat. Pe lângă unele întreprinderi, concurează pentru performanța în siguranța produselor, este imperativ ca acestea să reducă costurile și să crească eficiența, iar înlocuirea internă va deveni, de asemenea, principala cale pentru dezvoltarea industrială. Imunitar Mărgele magneticeBilele magnetice ActSep ® CD3/CD28 pentru separare și activare (cod articol: GMP-TL603) de la Tonglihaiyuan sunt materii prime importante pentru prepararea celulelor CAR-T și joacă un rol foarte important în procesul de separare și activare a celulelor T. Produsul Tonglihaiyuan, la nivel GMP, cu perle magnetice ActSep ® CD3/CD28 pentru separare și activare (cod articol: GMP-TL603), integrează funcții de separare și activare pentru a realiza eficient separarea, activarea și amplificarea celulelor T. Este potrivit pentru aplicații conexe cu celulele T umane, CAR-T și alte culturi de celule T. Mai mult, produsul a finalizat depunerea DMF tip II la FDA din SUA (număr de înregistrare: 038124), susținând înregistrarea și declararea medicamentelor celulare.

Bile magnetice ActSep® CD3/CD28 pentru separare și activare

1. Nivelul de epuizare a celulelor T

Nivelurile de expresie ale LAG3 și PD1 sunt detectate după 14 zile de cultură de activare a celulelor T, cu diferite raporturi de adăugare a bilelor magnetice. ActSep® este practic același cu cel al concurenților. Expresia indicelui de epuizare ActSep® este mai mică sub raportul de 3:1 bilelor magnetice la celulă. În plus, îndepărtarea bilelor magnetice în ziua 5 va reduce și mai mult nivelul de epuizare a celulelor T.

2. Analiza subtipurilor de celule T

Detectează modificările subtipurilor de celule T în diferite puncte de cultură după activarea separării cu ActSep®. Proporția de Tcm crește în timpul procesului de cultivare, iar raportul dintre Teff și Tem crește odată cu prelungirea timpului de cultivare.

Despre T&L
T&L Biotechnology Ltd., fondată în 2011, se concentrează pe cercetarea și dezvoltarea de materii prime și reactivi de calitate GMP pentru terapia celulară și genică (CGT). Ne angajăm să furnizăm produse și servicii fiabile pentru știința vieții.